王迎春 王梦 曹文利 田宇柔 康立英 李军山 牛丽颖

摘要：为了进一步完善麻黄-桂枝药对的质量评价方法，利用HPLC法，分别在2种波长条件下，同时测定麻黄-桂枝水煎液中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、香豆素、肉桂酸、桂皮醛5种成分的含量。采用Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，柱温为35 ℃，波长分别为210，280 nm。结果表明，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、香豆素、肉桂酸和桂皮醛的进样量分别为0.292 6～2.926 0，0.205 6～2.056 0，0.016 2～0.162 0 ，0.021 8～0.218 0，0.052 6～0.526 0 μg时，均呈现出良好的线性关系（r≥0.999 1）;平均加样回收率为96.24%～104.03%（RSD<3%，n=9）。建立的检测方法准确、可靠，可为麻黄-桂枝药对的质量控制及配伍研究提供参考。

关键词：中药化学;高效液相色谱;波长切换;含量测定;麻黄;桂枝;药对

中图分类号：R284.1文献标识码：ADOI：
10.7535/hbgykj.2021yx03005

Abstract：In order to further improve the quality evaluation method of Ephedra-Cinnamomi Ramulus drug pair， the contents of ephedrine hydrochloride， pseudoephedrine hydrochloride， coumarin， cinnamic acid and cinnamaldehyde in the decoction of Ephedra-Cinnamomi Ramulus were determined by HPLC at two wavelengths. The analysis was carried out on a Diamonsil C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm） by gradient elution with acetonitrile-0.1% phosphoric acid aqueous solution at a flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was controlled at 35 ℃.The detection wavelength was 210 nm and 280 nm respectively. The results show that it has a good linearity in the ranges of 0.292 6～2.926 0， 0.205 6～2.056 0， 0.016 2～0.162 0， 0.021 8～0.218 0  and 0.052 6～0.526 0 μg for ephedrine hydrochloride， pseudoephedrine hydrochloride， coumarin， cinnamic acid and cinnamaldehyde， respectively （r≥0.999 1）. The average recovery rates are 96.24%～104.03% （RSD<3%， n=9）. The established detection method is accurate and reliable， which can provide reference for the quality control and compatibility research of Ephedra-Cinnamomi Ramulus drug pair.

Keywords：chemistry of Chinese material medical; HPLC; wavelength switching; content determination; Ephedra; Cinnamomi Ramulus; drug pair

麻黃-桂枝药对出自《伤寒论》麻黄汤，为辛温解表的常用组合[1]。麻黄味辛、微苦，性温，具有发汗散寒，宣肺平喘，利水消肿之功效;桂枝味辛、甘，性温，具有发汗解肌，温通经脉，助阳化气，平冲降气之功效[2]。麻黄善行肌表卫分，乃发汗之要药，桂枝透营达卫，助麻黄解表散邪，麻黄、桂枝相须为用[3-5]。麻黄的化学成分主要包括生物碱类、挥发油类等[6]，桂枝主要含有挥发油类、有机酸类等[7-8]。查阅文献，对麻黄-桂枝药对的研究多集中在药理活性等方面[9-12]，对其化学成分研究较少。徐文杰等[13]研究不同配伍配比对麻黄-桂枝药对有效成分含量的影响，分别采用GC-MS测定水煎液中麻黄类生物碱含量，采用HPLC测定水煎液中香豆素、桂皮醇、桂皮醛的含量。李晓如等[14]利用气相色谱-质谱对麻黄-桂枝的挥发油成分进行测定。目前未见HPLC法同时测定麻黄-桂枝水煎液中麻黄类生物碱和肉桂酸、桂皮醛等主要成分的报道。本实验建立HPLC法同时测定麻黄-桂枝药对水煎液中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、香豆素、肉桂酸和桂皮醛5种成分的含量，为麻黄-桂枝药对的质量控制及配伍的研究提供参考。第3期王迎春，等：HPLC法同时测定麻黄-桂枝药对水煎液中5种成分的含量河北工业科技第38卷

1仪器与材料

1.1仪器

LC-15C高效液相色谱仪（SPD-15C型紫外检测器，日本岛津公司提供）;TB-215D电子分析天平（十万分之一）、BSA224S-CW电子分析天平（万分之一）（德国赛多利斯集团提供）;KQ-250E型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司提供）。

1.2材料

盐酸麻黄碱（批号为171241-201508，纯度为99.8%）、盐酸伪麻黄碱（批号为171237-201510，纯度为99.8%）、肉桂酸（批号为110786-201604，纯度为98.8%），中国食品药品检定研究院提供;香豆素（批号为MUST-18040901，纯度为99.99%），成都曼思特生物科技有限公司提供;桂皮醛（批号为151119，纯度大于等于98.0%），成都普菲德生物技术有限公司提供。甲醇、乙腈（色谱纯），Fisher公司提供;磷酸（分析纯），天津市北方天医化学试剂厂提供;水为超纯水。实验所用中药饮片均为市售中药饮片，3批麻黄、桂枝饮片分别购自石家庄乐仁堂（麻黄批号为19111001，桂枝批号为20022101）、神威大药房（麻黄批号为19050101，桂枝批号为19031617）和新兴大药房（麻黄批号为2002121，桂枝批号为190902cp256），经河北省药品检验院孙宝惠（主任）鉴定，麻黄为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica Stapf.的干燥草质茎，桂枝为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl.的干燥嫩枝。

2方法与结果

2.1麻黄-桂枝水煎液制备

称取麻黄饮片12.0 g，桂枝饮片8.0 g，加10倍量水，麻黄浸泡30 min，先煎煮20 min，加入桂枝继续煎煮，煮沸后保持微沸30 min，过滤;药渣加8倍量水，煮沸后保持微沸20 min，过滤;合并2次滤液，定容至300 mL，得麻黄-桂枝水煎液。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液

分别精密称取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、香豆素、肉桂酸、桂皮醛对照品适量，加甲醇制成质量浓度分别为1.219，0.514，1.017，0.546，0.526 mg/mL的单一对照品储备液。分别精密量取一定量的上述储备液，置于同一量瓶中，加甲醇制成每1 mL含盐酸麻黄碱146.3 μg、盐酸伪麻黄碱102.8 μg、香豆素8.1 μg、肉桂酸10.9 μg、桂皮醛28.4 μg的混合对照品溶液。

2.2.2供试品溶液

精密吸取2.1项中麻黄-桂枝水煎液4 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声处理（功率250 W，频率35 kHz）20 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3色譜条件

色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸（B），梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1，检测波长分别为210 nm（0～20 min）、280 nm（20～60 min），流速为1.0 mL/min，柱温为35 ℃，进样量为10 μL。混合对照品和供试品溶液的HPLC色谱图如图1所示。

2.4方法学考察

2.4.1线性关系考察

分别精密吸取混合对照品溶液2，4，6，10，15，20 μL，按2.3项中色谱条件测定。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，进行线性回归，回归方程与线性范围结果见表2。

2.4.2精密度试验

精密吸取混合对照品溶液10 μL，按2.3项中色谱条件连续进样6次，计算各成分峰面积的RSD，依次为0.51%，0.63%，0.78%，0.52%，0.47%。结果表明仪器的精密度良好。

2.4.3稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别在0，4，8，12，16，24 h按2.3项中色谱条件测定，计算各成分峰面积的RSD，依次为1.23%，0.82%，0.94%，0.59%，1.60%。结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.4重复性试验

取同一批麻黄-桂枝水煎液，按2.2.2制备6份供试品溶液，按2.3中色谱条件测定，计算各成分的平均质量浓度，分别为0.319 2，0.246 8，0.020 1，0.029 4，0.054 1 mg/mL，RSD分别为2.08%，1.75%，1.83%，1.68%，1.82%。结果表明该方法的重复性良好。

2.4.5加样回收试验

精密吸取已测得含量的麻黄-桂枝水煎液2.0 mL，平行吸取9份，分别精密加入等同于样品中各成分含有量50%，100%，150%的各单一对照品储备液，按照2.2.2项制备供试品溶液，按2.3项中色谱条件测定，计算加样回收率及RSD，结果见表3。

2.5样品测定

取3批次麻黄、桂枝饮片，按2.1项中制备麻黄-桂枝水煎液，按2.2.2项制备供试品溶液，按2.3项中色谱条件测定，平行3次，计算3批水煎液样品中各成分的含量，结果见表4。

3讨论

麻黄-桂枝为临床上常用的药对，是《伤寒论》中辛温发汗的常用组合。《伤寒论》中涉及麻黄-桂枝配伍的方剂有9方，分别是麻黄汤（3∶2）、葛根汤（3∶2）、葛根加半夏汤（3∶2）、大青龙汤（3∶1）、小青龙汤（1∶1）、桂枝二越婢一汤（1∶1）、桂枝麻黄各半汤（8∶13）、桂枝二麻黄一汤（5∶13）、麻黄升麻汤（10∶1），各方中麻黄-桂枝的配伍比例以3∶2居多[15]。本实验参考《伤寒论》中涉及麻黄-桂枝配伍方剂的煎煮方法，查阅相关文献[16-17]，结合《医疗机构中药煎药室管理规范》要求，确定了2.1项中样品溶液制备方法。

本实验分别考察了乙腈-1%醋酸、甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸3种流动相系统，以各色谱峰的分离度和峰形为指标进行比较，结果发现乙腈-0.1%磷酸作为流动相梯度洗脱时，各色谱峰的分离度及峰形较好，故选择乙腈-0.1%磷酸为流动相。

采用PDA检测器在200～400 nm进行紫外吸收光谱扫描，结果盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、香豆素、肉桂酸、桂皮醛5种化学成分的最大吸收波长分别为205，205，276，276，288 nm，由此选择210 nm作为检测盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的波长，选择280 nm作为检测香豆素、肉桂酸、桂皮醛的波长。

4结语

本实验通过切换波长，建立了HPLC法同时测定麻黄-桂枝药对水煎液中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、香豆素、肉桂酸、桂皮醛5种化学成分含量的分析方法，共测定了3批麻黄-桂枝水煎液中上述5种成分的含量。结果显示，不同批次麻黄-桂枝水煎液中上述5种成分的含量波动较大，特别是盐酸伪麻黄碱和桂皮醛的含量。这可能与实验用的3批麻黄、桂枝的厂家、采收时间及存放时间不同有关。本实验所建立的方法操作简便，重复性好，可为麻黄-桂枝药对的质量控制与评价及后续研究提供参考。

本实验仅对市售的3批不同厂家的麻黄和桂枝饮片按3∶2配比制备的水煎液进行了5种成分的含量测定，后续将会增加样本数目，分别测定麻黄、桂枝单煎液和麻黄-桂枝合煎液中主要成分的含量，考察麻黄、桂枝配伍前后各成分含量变化情况。不同配伍配比的麻黄-桂枝水煎液中各成分的含量变化规律及药效学考察有待进一步研究。

参考文献/References：

[1]邵家东，陈萌，都广伍，等.麻黄汤中桂枝的配伍意义解析[J].中国中医基础医学杂志，2018，24（9）：1290-1291.

SHAO Jiadong， CHEN Meng， DU Guangwu， et al. Analysis of the significance of compatibility of Guizhi in Mahuang decoction [J]. Journal of Basic Chinese Medicine， 2018，24（9）：1290-1291.

[2]國家药典委员会.中华人民共和国药典（2015年版 一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

[3]蔡鸿彦，武晓璐，王春兰，等. 仲景发汗解表方中麻黄配伍规律及临证体会[J]. 中医药通报，2018，17（4）：15-17.

[4]赵艺，尹学华，李敬孝.《金匮要略》中麻黄类药对配伍规律浅析[J].中医药信息，2014，31（4）：34-35.

[5]蔡鸿彦.《伤寒杂病论》中有关麻黄配伍的初步探讨[J].长春中医药大学学报，2010，26（6）：976-977.

[6]汪映宇.草麻黄化学成分的研究[J].抗感染药学，2014，11（5）：416-418.

WANG Yingyu. Study on chemical constitutents of Ephedrae Herba[J]. Anti-Infection Pharmacy，2014，11（5）：416-418.

[7]蔡芷辰，李振麟，徐谦，等.桂枝的化学成分分析[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（22）：57-60.

CAI Zhichen， LI Zhenlin， XU Qian， et al. Chemical contituents from Ramulus of Cinnamomum cassia[J]. Chinese Journal of Experimental  Traditional Medical Formulae， 2014，20（22）：57-60.

[8]徐锋，王德健，曾南.桂枝挥发油化学成分的研究进展[J].天然产物研究与开发，2017，29（3）：532-541.

XU Feng， WANG Dejian， ZENG Nan. Review on chemical components of Rimulus cinnamon essential oil[J]. Natural Product Research and Development，2017，29（3）：532-541.

[9]李向平. 不同环境温度刺激下麻黄-桂枝药对效应成分发汗作用的研究[J].临床医药文献杂志，2014，1（5）：655-657.

LI Xiangping. Different environment temperature stimulation of Ephedra Guizhi medicine research on the effect of component-transpiration effect[J].Journal of Clinical Medical，2014，1（5）：655-657.

[10]郑芳昊，罗佳波.微透析采样考察麻黄-桂枝药对配伍对麻黄碱药代动力学的影响[J].中国实验方剂学杂志，2016，22（16）：80-83.

ZHENG Fanghao， LUO Jiabo. Pharmacokinetics of ephedrine in rats treated with herb pair of Ephedrae Herba-Cinnamomi Ramulus by microdialysis[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，2016，22（16）：80-83.

[11]郑芳昊，罗佳波.脑透析法考察麻黄-桂枝药对配伍对麻黄碱在额叶皮层部位药代动力学的影响[J].中药药理与临床，2016，32（2）：9-13.

ZHENG Fanghao， LUO Jiabo. Study on pharmacokinetics of ephedrine in rats brain treated with Mahuang-Guizhi pair by microdialysis[J]. Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica，2016，32（2）：9-13.

[12]卫平，陈飞龙，马钦海，等.麻黄-桂枝配伍对麻黄类生物碱、桂皮酸及桂皮醇在大鼠体内药动学的影响[J].中国药理学通报，2016，32（6）：873-880.

WEI Ping， CHEN Feilong， MA Qinhai， et al. Effects of combined administration of Ephedrae-Cinnamomi on pharmacokinetics of ephedra alkaloids， cinnamic acid and cinnamic alcohol in rats[J].Chinese Pharmacological Bulletin，2016，32（6）：873-880.

[13]徐文杰，陈飞龙，谢颖，等.不同配伍配比对麻黄-桂枝药对有效成分含量的影响[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（10）：84-88.

XU Wenjie， CHEN Feilong， XIE Ying，et al. Content of active compounds in water extracts of Ephedra with Cinnamomi by compatibitity of different ratio[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，2012，18（10）：84-88.

[14]李晓如， 梁逸曾， 李晓宁. 气相色谱-质谱和化学计量学解析法分析药对麻黄-桂枝挥发油成分[J]. 药学学报，2007，42（2）：187-191.

LI Xiaoru， LIANG Yizeng， LI Xiaoning. Analysis of essential oil in Herba Ephendrae-Ramulus Cinnamami by GC-MS and chemometric resolution method[J]. Acta Pharmaceutica Sinica，2007，42（2）：187-191.

[15]隋博文，王浩，张婧，等. 基于“方证相应”理论探讨麻黄类方中麻黄配伍规律[J].吉林中医药，2019，39（5）：669-673.

SUI Bowen， WANG Hao， ZHANG Jing， et al. Compatibility rule of Herba Ephedrae in Herba Ephedrae prescription based on correspondence of prescription and syndrome theory [J]. Jilin Journal of Chinese Medicine， 2019，39（5）：669-673.

[16]徐靜，张慧，傅延龄.《伤寒论》《金匮要略》药物煎煮法中“沸”字探析[J].中医杂志，2012，53（19）：1703-1704.

[17]傅延龄，陈非，李东一，等.《伤寒论》方的煮药时间[J].北京中医药大学学报，1998，21（6）：8-11.

猜你喜欢 麻黄桂枝高效液相色谱 麻黄张仲景的心头好文萃报·周二版(2021年3期)2021-04-01治三叉神经痛妇女生活(2019年2期)2019-02-20喊魂小小说月刊(2018年5期)2018-05-18降脂保肝颗粒药材共提后人参皂苷类成分变化的初步研究中国民族民间医药·下半月(2017年3期)2017-03-31高效液相色谱法同时测定8种食品添加剂湖北农业科学(2016年21期)2017-03-18我的发现快乐作文·低年级(2016年7期)2016-09-22心中的麻黄山六盘山(2014年4期)2016-06-24麻黄山，人间四月杏花艳宁夏画报(2016年4期)2016-05-25骂村小小说月刊·下半月(2016年8期)2016-05-14HPLC手性固定相法拆分YNC光学异构体现代仪器与医疗(2015年2期)2015-12-03

相关热词搜索： 麻黄 桂枝 测定